BIOBASIC液相色譜柱的系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統,樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數,在兩相中作相對運動時,經過反復多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來。
在液相色譜分離系統中,色譜填料選擇的正確與否會直接影響到專業(yè)的BIOBASIC液相色譜柱分離物質效果的好壞。由于BIOBASIC液相色譜柱填料具有相當寬的選擇范圍,所以我們在購買BIOBASIC液相色譜柱之前有必要對不同液相色譜填料進行一個簡單的認識和了解。
正相色譜硅膠基質填料。BIOBASIC液相色譜柱的固定相是由硅膠和其他具有極性官能團組成的鍵合相填料。其物質分離特點是極性較弱組合zui先被色譜柱沖洗出來。而且正相色譜所使用的流動相其極性要低于固定相,流動相通常使用正乙烷和二氯甲烷等。
反相色譜硅膠基質填料。反向色譜柱的填料是以硅膠材料為主要物質,并與極性相對較弱的官能團組成的鍵合相。其物質分離特點是極性較強組合zui先被色譜柱沖洗出來,而極性弱的組分則會更強的保留在柱子上。反向色譜的流動相的極性相對較強,常配制有機緩沖液作為流動相。目前較為常用的反相色譜填料有C4(B)、C8(MOS)以及C18(ODS)等。
聚合物填料。這種聚合物的填料一般是由聚甲基丙酸酯或者聚苯乙烯-二乙烯基苯組成。其特點是這種色譜柱的酸堿度適用范圍相對較廣,且疏水性很強,但它的柱效相對于硅膠基質的填料要低一些。一般將這種大孔的基質填料用于蛋白質的分離。
其他無機填料。如石墨化碳對于酸堿度和溫度沒用嚴格的限制范圍,一般可對一些幾何導構體進行分離。此外還有氧化鋁以及氧化鋯等無機填料的應用。
BIOBASIC液相色譜柱選擇的簡單思路:
1.確定分離目的確定你的應用是否要求高分離度、短分析時間、高靈敏度、長柱壽命,低的操縱本錢等等。
2.評估分析物的化學性質評估分析物的化學性質..諸如化學結構、溶解性、穩(wěn)定性等等。
3.選擇合適的BIOBASIC液相色譜柱了解色譜填料的物理和化學性質。